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分子生物学试剂

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详细介绍Detailed Introduction

BioRun Fast Site-Mutation Kit

价格:咨询有惊喜哟
说明书:点击下载 

一步法单/多位点定点突变试剂盒

产品描述
       BioRun Fast site-mutation Kit是一款适用于基因快速定点突变的试剂盒套装,可以一步实现目标基因1-5个不连续位点的同时突变。本试剂盒是基于BioRun Seamless同源重组的单/多位点定点突变系统,包含2×BioRun Pfu Super Mix、BioRun DpnI和Assemble重组试剂。BioRun Fast site-mutation Kit极大的简化了多位点突变的连续PCR过程,并且具有良好的稳定性和可重复性,能让你快速、便利的完成定点突变实验。

产品特点
1、2×BioRun Pfu Super Mix精准地复制目标基因和载体片段;
2、基于同源重组原理,设计基因突变时不需要考虑酶切位点的影响;
3、BioRun DpnI快速、高效的降解本底质粒,最大程度降低了野生型基因残留;
4、1~5个不连续位点一次性突变,方便又迅速;
5、试剂盒提供了定点突变需要的所有酶试剂,无需额外购买酶等试剂;
6、适用范围:酶蛋白定点突变,酶蛋白结构域重组,DNA单/多碱基突变。

定点突变引物设计工具:http://www.biorun.com/tools/108.html

产品组分

应用实例
T189M突变体构建
靶标蛋白ProI基因全长约2600bp,重组在pET-30a载体上,将其189号氨基酸Thr突变为Met,主要实验过程如下:
1、使用2×BioPfu Super Mix扩增pET-30a_ProI重组载体(全长7.8kb),PCR产物经0.5μL BioRun DpnI消化l0min,2h完成。
2、电泳检测PCR产物,条带单一且清晰明亮,取大约50ng PCR产物,加入2×BioRun Assemble Mix进行连接反应,50℃孵育15min,30min完成。
3、取5μL连接产物转化大肠杆菌DH5α 感受态细胞,1.5h完成(含无抗孵育lh)。
4、过夜培养,次日挑取3个克隆子进行菌体PCR验证,全部为阳性克隆。
5、对克隆子1进行测序,结果如下:


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