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分子生物学试剂

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详细介绍Detailed Introduction

同源重组克隆系列
同源重组原理
       同源重组试剂盒是一种简单、快速并且高效的DNA定向克隆试剂盒,可将插入片段PCR产物定向克隆至任意位点。将载体在克隆位点进行线性化,并在插入片段PCR引物5’端引入线性化克隆载体末端序列,使得插入片段PCR产物5’和3’最末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列(15~20bp)。这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化克隆载体按一定比例混合后,在同源重组酶的催化下,仅反应30min即可进行转化,完成定向克隆,克隆阳性率可达95%以上。

产品类别

BioRun Seamless Cloning Kit
价格:咨询有惊喜哟
说明书:点击下载

灵活多变的一体化超快速克隆试剂盒

产品描述
       BioRun Seamless Cloning Kit可将1~5个片段定向重组至载体中,可有效克隆50bp~20kb的片段到线性化载体中。将载体通过酶切或PCR线性化,并在扩增片段正、反向PCR引物5’端引入15~25bp同源序列,使得扩增产物之间以及扩增产物与线性化载体之间各有一段同源序列,各片段和线性化载体在重组酶的作用下,仅需50℃反应15~45min即可进行转化,克隆阳性率可达95%以上。

产品特点
1、快速克隆:重组反应仅需15~45min;
2、多片段克隆:线性化载体可有效组装1~5个片段;
3、高效:阳性率可达95%以上;
4、无缝:不引入额外的序列。
提供在线引物设计:提供在线引物设计软件(www.biorun.com/tools/107.html

产品组分

储存与运输
低温运输,-20℃储存,有效期1年。

应用实例
1、pCAMBIA1300用SacI和BamHI双酶切,线性化载体大小约9kb,装1个0.9kb色素蛋白表达框。载体浓度为150ng/μL,10μL酶切体系切5μL pCAMBIA1300,37℃酶切30min,80℃失活20min,片段浓度为36ng/μL。重组体系如下表所示:

50℃重组15min,取3μL转化100μL DH5α感受态。克隆结果如图所示:蓝色斑点为正确的阳性克隆。

2、pCAMBIA1300用SacI和BamHI双酶切,线性化载体大小约9kb,装3个片段。载体浓度为150ng/μL,10μL酶切体系切5μL pCAMBIA1300,37℃酶切30min,80℃失活20min。Seg1片段1kb,回收浓度为50ng/μL,seg2色素蛋白表达框0.9kb,回收浓度为38ng/μL,seg3片段1.2kb,回收浓度80ng/μL。重组体系如下表所示:

50℃重组15min,取5μL转化100μL DH5α 感受态。克隆结果如图所示:蓝色斑点为正确的阳性克隆。

 

BioRun DpnI
产品描述
       BioRun DpnI识别并酶切DNA双链中腺嘌呤N6位甲基化(N6-methyladenine)的GATC序列。BioRun DpnI识别位点中两个腺嘌呤的N6位都甲基化时,呈现正常的酶活力;只有一个腺嘌呤的N6位甲基化时,酶切活力会降低约60倍。
       从dam+(Dam甲基化酶表达阳性)大肠杆菌菌株如DH5α等提取的质粒的GATC序列中腺嘌呤N6位被甲基化,从而可以被BioRun DpnI识别和酶切;而从dam-(Dam甲基化酶表达阴性)大肠杆菌菌株如JM110等提取的质粒的GATC序列中腺嘌呤N6位没有被甲基化,从而不能被BioRun DpnI识别和酶切。

产品组分

 
酶切位点
 
反应温度
37℃

失活条件
65℃温育20min

用途
去除PCR产物中的背景质粒,降低同源重组克隆的假阳性率。

使用方法
直接在PCR产物中加BioRun DpnI,每50µL PCR产物添加1µL的BioRun DpnI。37℃处理15~30分钟,再80℃失活20分钟。若酶切连接反应或者重组体系全为PCR片段,则无需失活直接反应。

运输与保存
低温运输,-20℃保存,有效期1年。


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