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检测服务

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详细介绍Detailed Introduction

基于一代高通量测序技术对基因编辑材料的鉴定技术

原理简介
       根据目标基因sgRNA的位置,设计特异性的检测引物,接着对阳性植株进行DNA提取、PCR扩增和一代测序;最后对获取PCR产物的峰值图进行生物信息学解读,鉴定岀相应的突变形式。特异性引物设计如下:       
基因编辑检测原理图
实验目的
1、减轻客户繁琐的鉴定工作,将时间用于更重要的科研工作;
2、鉴定出转基因敲除苗,并对敲除苗的具体突变形式进行生物信息学解读。

实验流程
客户在线下单—订单(靶点及基因组)/实验材料确认—引物设计—DNA提取—PCR扩增—测序鉴定—生物信息学解读—目标基因敲除株系鉴定—上传检测结果—打印实验报告

我司优势及特点
1、贴近成本的定价
2、详细的鉴定报告
3、快速的实验周期

客户下单及项目信息填写
在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录,请客户按照页面提示填写:
1、项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式进行预提交;
2、提交项目所需要的具体信息,包括:物种、敲除的目标基因序列、靶标、样品总数及明细、检测要求。

实验信息
实验过程中客户可以随时登入管理系统査看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户,并发送实验报告査看网址。实验结题后,实验报告、检测结果可在线查看或打印,并永久保留。

实验交付内容
1、PCR测序ABI 文件;
2、基因敲除苗生物信息学解读结果。

案例展示

基因敲除苗测序峰

注:蓝色标出部分表示目的基因的sgRNA序列

                         生物信息学解读峰值图后判定结果

植物组织样品取样建议
核酸提取质量与物种及组织部位、采集方法及保存状态、提取方法及操作、实验器材环境等因素息息相关,为保障获得相对较高质量的核酸,请务必按照以下指导原则准备样本。
1、液氮速冻法

  植物材料取材后用清水将材料表面的灰尘及泥土冲洗干净,吸干材料表面的液体。
②  植物组织样品取样重量≥200mg,将样品分割成50~100mg左右的小块,放入干净的离心管或带螺纹旋盖的保存管中,立即使用液氮速冻。
③  转移至-80℃低温保存,送样时选择干冰运输寄送。
2、商用核酸保护液保存法
由于植物含细胞壁,从已有经验看来,RNAlater之类的核酸保护液难以充分渗透,对于植物样品提取效果较差,不建议使用;若条件有限,只能使用核酸保护液,请严格按照相应的产品使用说明操作。尽量使组织块尺寸保持在5mm左右,过小不利于样本收集,过大则保护液不能均匀渗透到组织细胞内。
对于多糖多酚丰富的植物样本(特别是木本类植物),需暗处理24-48小时后再取样。

注意事项
1、组织速冻时间:组织离体后,胞内核酸便开始降解,尤其是RNA,故采集时,目的组织离体后,需立即速冻,建议5min内完成,越快越好。
2、组织送样量:送样量过少或过多均不利于提取实验,下限为建议量的一半,上限为建议量的3倍。
3、组织保存管的选择:所有组织样品务必使用离心管或螺纹管保存,切勿直接装入密封袋保存(低温冻脆易破裂,导致样品泄露,交叉污染)。
4、组织样品保存方法选择:首选液氮速冻;没有液氮条件的,可直接放入-80℃冰箱冻存。
5、冻融组织:组织冻存后,一旦冻融,RNA降解概率大于80%,几乎不可能提取成功,此类组织不建议送样。送样前确保组织未发生过冻融情况。
6、对于同一个组织样品需要同时提取DNA和RNA的,请务必分成两管分批次送样。



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