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检测服务

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详细介绍Detailed Introduction

GUS染色及定量检测

背景介绍
       基因的表达调控是一个多阶段、多层次的复杂过程,简单的可以分为转录前、转录、转录后、翻译、翻译后这五个水平,其中转录水平上的调控是很关键的一环。启动子是位于基因5‘端上游的DNA序列,能指导RNA聚合酶与DNA的正确结合、活化RNA聚合酶、募集相应的转录因子形成特异性转录起始复合体等,进而决定转录的方向和效率,是基因表达调控的重要顺式元件,因此深入研究启动子的结构、功能、作用模式等对于理解基因功能有重要的作用。
       启动子的表达模式及强度只能通过报告基因来检测,目前在植物启动子的研究中常用的报告基因有伊葡萄糖昔酸酶基因(GUS)、 绿色荧光蛋白基因(GFP)及其衍生岀来的其他荧光蛋白、荧光素酶基因(LUC)等。

实验原理
1、 GUS染色
       GUS基因编码β-葡萄糖醛酸乙酰转移酶,属水解酶类,在适宜的条件下,该酶可将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖苷酸酯(X-Gluc)水解生成蓝色产物。
2、 GUS报告基因的定量检测
       GUS 能与底物4-甲基伞型酮-β-葡萄糖醛酸苷(MUG,分子量352.3)反应产生荧光物质4-甲基伞型酮(MU,分子量198.2)。MU的激发波长为365nm,发射波长为456nm,其含量可由酶标仪测出。因此,我们可以根据单位质量的植物总蛋白在单位时间内产生的荧光物质的多少来定量的检测GUS含量。

适用场景
1、 分析基因的启动子表达的时空性和表达强度;
2、 通过组织化学染色来做启动子活性的定性分析,还可以做启动子活性的定量检测;
3、 鉴定启动子的顺式作用元件。


注:如果样本有其他特殊情况周期会延长(如基因表达量低导致染色情况不好,将以PCR实验为准判定结果,并收取成本费)。

实验流程
客户在线下单—订单/实验材料确认无误—开展实验—拍照/酶活检测—出具实验报告—项目结题
 

实验交付内容
1、  GUS染色服务,提供手机拍照服务(专业拍照需要额外收费),可以返还染色后的叶片材料。
2、  GUS酶活性定量检测,提供实验报告。


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