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蛋白相关服务

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详细介绍Detailed Introduction

免疫共沉淀(Co-IP)

原理简介
       免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。
       其原理是使用靶蛋白特异性抗体间接捕获与特定靶蛋白结合的蛋白来鉴定体内相关的蛋白-蛋白相互作用,是研究蛋白质互作的经典方法。特异性抗体捕获样品中的靶蛋白,形成抗体-靶蛋白复合物,然后利用能够与抗体结合的珠状支持物(例如Nanoab-Aga- rose)来固定和沉淀复合物,同时与靶蛋白相互作用的蛋白也会被沉淀下来,最后洗去与靶蛋白相结合的非特异性蛋白,再通过SDS-PAGE进行分析、Western blot检测。

适用场景
1、测定两种目标蛋白质是否在体内结合;
2、鉴定与特定蛋白相互作用的未知蛋白(通常与质谱连用,也称IP-MS);
3、分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

实验材料
 

Co-IP实验流程
 

 IP-MS实验流程

免疫共沉淀的优点
1、相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;
2、蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;
3、可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

免疫共沉淀的缺点
1、可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;
2、两种蛋白质的结合可能不是直接结合,可能有第三者在中间起桥梁作用。

实验流程和周期
1、使用自身蛋白抗体

蛋白样品准备—Protein G磁珠与抗体结合—免疫沉淀分离—洗脱蛋白复合物—SDS-PAGE分离、Western blot及(或)质谱鉴定相互作用蛋白质—实验报告提交
实验周期:15个工作日,如需质谱鉴定按难易程度需要15-45个工作日
2、使用常见标签抗体
蛋白样品准备—琼脂糖beads与抗体结合—免疫沉淀分离—洗脱蛋白复合物—SDS-PAGE分离、Western blot及(或)质谱鉴定相互作用蛋白质—实验报告提交
实验周期:15个工作日,如需质谱鉴定按难易程度需要15-45个工作日

样品接收标准

客户下单及项目信息填写
在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录,请客户按照页面提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式,提交项目所需要的具体信息,包括:
1、组织、细胞、蛋白质溶液等样品、用于免疫共沉淀的一抗(如果公司抗体库里没有)及目的蛋白的相关信息;
2、如需构建基因的过表达载体,则还需提供过表达载体及其相关信息,没有载体的本公司可以构建载体;
3、其他与免疫共沉淀相关信息。

实验信息
实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户,并发送实验报告查看网址。实验结题后,实验报告,检测结果可在线查看或打印,并永久保留。

实验交付内容
1、免疫共沉淀电子图片及分析结果;
2、相互作用蛋白鉴定结果,western blot鉴定结果和(或)质谱鉴定结果;
3、完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。
 
图 Co-IP实验结果展示


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