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分子生物学服务

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详细介绍Detailed Introduction

植物人工小RNA载体

原理简介
       miRNA是一类长约18〜25个核昔酸的内源性非编码单链RNA,可与靶基因mRNA的3'UTR完全或不完全互补结合,从而降解靶基因mRNA或抑制mRNA的翻译,最终在转录水平(TGS)、转录后水平(PTGS)调控靶基因的表达,进而介导RNAi现象,是基因表达调控的重要手段之一。
       在人类细胞系中发现以天然存在的miRNA前体为结构基础构建人工miRNAs (artificial microRNA,amiRNAs)转入细胞后,可有效抑制靶基因的表达(Zeng et al., 2002)。利用相同原理,amiRNA载体在植物中也有不俗的表现,amiRNA载体在体内倾向于只转录成针对靶基因的沉默RNA (silencing RNA, sRNA),特异性极强,与内源miRNA对靶基因的优良沉默效果相似(Niu et al., 2006, Schwab et al., 2006, Warthmann et al., 2008, Li et al., 2014)。


图 过量表达amiRNAs在水稻中的表型,空载体对照均居于左侧(Warthmann et al., 2008)。

我司载体介绍
        我司原始干扰载体中含有CaMV35S或Ubiquitin启动子来启动转录单元的转录,载体上携带卡纳原核抗性和真核筛选标记(可选潮霉素、Basta或G418进行筛选)。我们可以针对您的目的基因序列,设计靶基因的amiRNA/amiRNA*序列,将其克隆到载体以后能够模拟osa-miR528结构,从而抑制目的基因表达。

我司人工miRNA干扰载体列表。可根据不同的需求,选择不同的启动子及真核抗性的载体。

适用场景
       进行基因功能的研究,降低目标基因的表达水平。同hpRNA扰类似,一般amiRNA引起的基因沉默会下调基因表达,不能彻底使其失活。amiRNA干扰技术更适用于特异干扰基因家族研究中序列同源性较高的基因。

优势特点
1、采用我司已被授权的国际PCT专利技术(专利号:US 10,144,936 B2)来进行片段组装及无缝组装;
2、载体资源丰富,除了上述常用的CaMV35S、Ubi启动子外,我司也提供G10-90、rbcS、Per、GluB-4、GluA-1等诱导型或特异性启动子的amiRNA载体构建服务,也可个性化订制您有其它需求的载体;
3、载体库中有多种真核筛选标记(可选潮霉素、Basta或G418进行筛选)的原始载体可供选择;
4、载体均为双元载体,可直接应用于后期单子叶和双子叶遗传转化;
5、可以与我司转基因服务、检测服务、蛋白服务等衔接,整个实验可以畅通且快速地完成。

实验流程
客户在线下单—订单/实验材料确认—CloneCAD实验设计—RNAi载体构建—遗传转化—PCR鉴定阳性株系(后两步为可选项) 

实验周期
5个工作日

客户下单及项目信息填写:
在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录,请客户按照页面提示填写项目名称,选择项目类型[植物人工小RNA载体]、项目所需要的具体信息,价格由系统自动计算。 

实验信息
在实验开始、结题关键节点系统会自动发送短信到申请人手机进行告知,实验过程中客户可以随时登录客户管理系统査看项目实时进展情况。实验结题后,实验报告、检测结果可在线査看,并永久保留。实验过程用到的菌株、载体、受体材料免费为客户保存半年后销毁。  

实验交付内容
1、重组载体的全序列信息和注释信息;
2、重组载体的酶切图谱;
3、重组载体的测序结果;

参考文献
Li Y, Li Y, Zhao S, et al., 2014. A simple method for construction of artificial microRNA vector in plant. Biotechnol Lett 36, 2117-23.
Niu QW, Lin SS, Reyes JL, et al., 2006. Expression of artificial microRNAs in transgenic Arabidopsis thaliana confers virus resistance. Nat Bio­technol 24, 1420-8.
Qin BX, Tang D, Huang J, et al., 2011. Rice OsGLl-1 is involved in leaf cuticular wax and cuticle membrane. Mol Plant 4, 985-95.
Schwab R, Ossowski S, Riester M, Warthmann N, Weigel D, 2006. Highly specific gene silencing by artificial microRNAs in Arabidopsis. Plant Cell 18, 1121-33.
Warthmann N, Chen H, Ossowski S, Weigel D, Herve P, 2008. Highly specific gene silencing by artificial miRNAs in rice. PLoS One 3, el829.
Zeng Y, Wagner EJ, Cullen BR, 2002. Both natural and designed micro RNAs can inhibit the expression of cognate mRNAs when expressed in human cells. Mol Cell 9, 1327-33.


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